液相色譜柱是高效液相色譜儀(HPLC)的核心分離組件,其性能直接影響分析結果的準確性與重復性。當出現峰形異常、柱壓升高、理論塔板數下降或固定相流失等情況時,需及時更換色譜柱。以下是規范的更換流程及關鍵注意事項:
一、前期準備
安全防護
佩戴防護手套、護目鏡及實驗服,避免接觸有機溶劑與尖銳部件。
關閉儀器電源并釋放系統壓力,防止高壓流體噴濺。
工具與材料
新色譜柱(型號/尺寸與原柱一致)、兩通連接器、扳手、密封墊片(PEEK材質優先)。
備用管路配件(若需調整長度)。
查閱儀器說明書及色譜柱技術參數表。
系統狀態確認
停止當前運行程序,切換至純流動相(如甲醇/乙腈),以低流速(0.5-1mL/min)持續沖洗至少30分鐘,清除管道內殘留樣品。
斷開檢測器信號線,標記進出管路接口位置。
二、舊柱拆卸步驟
定位色譜柱模塊
找到柱溫箱內的色譜柱支架,觀察管路連接順序(通常為:進樣閥→色譜柱→檢測器)。
逐步卸除舊柱
用扳手松開兩端螺母,先拆除出口端(靠近檢測器一側),緩慢放出殘余液體至廢液瓶。
等待片刻使系統泄壓后,再拆卸入口端。
禁止強行拉扯管路,以防損壞接頭螺紋。
清理接口與評估磨損
檢查篩板是否堵塞或變形,必要時用超聲波清洗。
記錄舊柱序列號、使用時長及故障特征,供后續選型參考。
三、新柱安裝要點
方向校驗
所有色譜柱均有明確流向標識(箭頭指向出口),反向安裝會導致填料塌陷。
部分反相柱頭尾均可使用,但正相/離子交換柱必須嚴格遵循方向。
無氣泡安裝
采用“液下對接法”:將新柱入口浸入裝有流動相的燒杯中,邊排氣邊連接管路。
開啟泵以極低流速(0.2mL/min)灌注,直至出口無氣泡排出。
扭矩控制
使用專用扳手按對角線交替旋緊螺母,力度適中(手感微阻即可),過度擰緊可能導致柱床壓縮。
建議安裝后運行期間定期檢查松動情況。
四、系統重啟與平衡
初始沖洗
以初始流動相組成(同比例混合)低流速沖洗60分鐘,觀察柱壓穩定性。
若柱壓異常偏高,可暫停并用異丙醇短時沖洗疏通。
梯度平衡
執行空白梯度程序,監測基線漂移量應<±0.5mAU。
進樣測試混合物驗證分離度,對比理論塔板數是否達標(N≥80%理論值)。
數據校準
更新工作站方法文件中的色譜柱信息,重新建立保留時間對照表。
保存新柱認證報告,包括柱效測試圖譜及壓力曲線。
通過標準化操作可最大限度延長色譜柱壽命,典型反相柱使用壽命可達500-1000次進樣。日常維護建議每周進行簡單沖洗,每月深度再生保養。